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将已烘干的切片在C8H10中脱蜡 5～10 分钟，两次。

移入C8H10和纯乙醇（1：1）混合液中 5 分钟左右（如经二次C8H10脱蜡，此步可省略）。

移入 100％、95％、85％、70％ 乙醇中，各级为 2～5 分钟。最后经蒸馏水转入染色液。

自己配制或商业化购买的苏木素染液染色 5～15 分钟。

流水冲洗 15～30 分钟，或者在 0.75％ 氯化铵溶液中短时间碱化或蓝化，使细胞核呈蓝色。

蒸馏水短洗。

依次经 70％、85％、95％ 乙醇脱水，各级为 2～3 分钟。

0.1％～0.5％ 伊红染液染色 1～5 分钟，若着色困难，可在每 100 ml 染液中加入 1～2 滴无水乙酸，使易着色且不易脱色。

依次快速通过 95％ 和 100％ 乙醇洗去多余的伊红染液，在浓度 95％ 以下的乙醇中伊红易脱色，应适当缩短时间。

C8H10透明（二次），共约 10 分钟。

封片擦去切片周围多余C8H10，切勿干涸，迅速滴加适量中性树胶，再加盖玻片封固，避免产生气泡。在通风橱中吹干C8H10，封片稳定后转移到片盒中保存。

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1.切片染色不匀

1.1组织取材固定不当。

如组织取材过大或过厚，不能将组织完全固定，组织切片染色后出现外周固定好的部分易着色，而中间未固定好的组织，细胞着色模糊，使染色不均。在送检的标本中，及时用4%中性甲醛对标本固定，固定液应是标本的4倍。大标本应切开固定。

1.2切片薄厚不均或有横纹。

切片刀有缺口时，易造成断裂，破碎和不完整；切片刀倾角过大上卷，不能连在一起，过小则切片皱起。

或因螺丝松动产生振动切片易造成厚薄不均或技术人员手臂摇动切片机头力量不均易造成横纹。

切片时检查切片机螺母是否拧紧，切片刀角度是否过大或过小即可。

1.3组织脱水，透明和浸腊处理不当

（1）组织脱水用的各级乙醇未能保证相应浓度使组织脱水不彻底。

（2）二甲苯内的时间过长组织易碎也无法切出好片子。

（3）浸腊温度过高，组织变脆也不利切片染色。

1.4染色过程处理不当

（1）组织切片脱腊不彻底，如二甲苯时间过久 ，无水乙醇不纯或时间过久，室温低，组织切片上的石蜡没有全部除掉时，含腊部分不着色或着色过浅染色液试剂量少，组织切片没有全部浸到 。

（2）组织切片上在捞片时有气泡，则气泡内组织可能染色不均。

2.切片染色模糊不清

2.1取材：

组织标本已发生自溶或取材后没及时固定或固定液浓度不够；另固定前干枯标本，染色后易出现灰染现象，很难补救。

2.2固定

（1）固定剂对组织有一定媒染作用，它既可与蛋白结合又能与染料结合，可增强着色能力，同时能沉淀和凝固细胞内成分，使细胞内成分产生不同折光率造成光学差异，故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因。

（2）在日常病理制片中淋巴结处理不当造成切片染色后组织见发灰现象，其主要原因由于细胞密集，结构复杂导致固定液难以渗透到组织深部，从而造成组织中央固定不佳，而出现彻底发灰现象。可用等量无水乙醇乙醚混合液处理切片5-10分钟，乙醇洗，水洗，3%硫酸铁铵溶液补充媒染5分钟既可。

（3）送检标本部分用乙醇固定组织，常温下乙醇的白蛋白，球蛋白不再溶于水，而核蛋白则可溶于水。故乙醇固定标本切片，切片染色不良，细胞质染色较差。切片出现模糊不清现象，其补救办法用4%中性甲醛对标本再固定。

3.其他原因

3.1温度：

包埋/切片后烤片温度过高，均会使蛋白发生质变可能发生拒染，造成切片染色模糊不清。

3.2染料：

质量差或溶液配制不当，如配制苏木精时加热使氧化过度，不能生成三氧化苏木红生成四氧化苏木红使染液没有染色能力或苏木精使用时间过久，导致切片着色能力或苏木精使用时间过久，导致切片着色不良，切片模糊不清。

3.3分化过度，细胞核着色淡

3.4脱水

透明不彻底：切片如在二甲苯中有白雾现象发生即表示乙醇脱水未尽，应立即返回重新脱水。否则，镜下组织结构模糊不清。

3.5封固

（1）注意避免封片者口鼻呼出气接触组织上封剂，因呼出气体中会含水分。

（2）在潮湿环境中动作要快，以免空气水进入封固内响质量。