【实验原理】

苏木精—伊红染色法，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。

苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

【应用简介】

HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。常用于组织形态结构的观察。

【实验方法】

【样本送检要求】

【案例展示】

【常见问题】

1.切片染色不匀

1.1组织取材固定不当。

如组织取材过大或过厚，不能将组织完全固定，组织切片染色后出现外周固定好的部分易着色，而中间未固定好的组织，细胞着色模糊，使染色不均。在送检的标本中，及时用4%中性甲醛对标本固定，固定液应是标本的4倍。大标本应切开固定。

1.2切片薄厚不均或有横纹。

切片刀有缺口时，易造成断裂，破碎和不完整。切片刀倾角过大上卷，不能连在一起，过小则切片皱起。或因螺丝松动产生振动切片易造成厚薄不均或技术人员手臂摇动切片机头力量不均易造成横纹。切片时检查切片机螺母是否拧紧。切片刀角度是否过大或过小即可。

1.3组织脱水，透明和浸腊处理不当

（1）组织脱水用的各级乙醇未能保证相应浓度使组织脱水不彻底

（2）二甲苯内的时间过长组织易碎也无法切出好片子。

（3）浸腊温度过高，组织变脆也不利切片染色。

1.4染色过程处理不当

（1）组织切片脱腊不彻底，如二甲苯时间过久 ，无水乙醇不纯或时间过久，室温低，组织切片上的石蜡没有全部除掉时，含腊部分不着色或着色过浅染色液试剂量少，组织切片没有全部浸到 。

（2）组织切片上在捞片时有气泡，则气泡内组织可能染色不均。

2.切片染色模糊不清

2.1取材：

组织标本已发生自溶或取材后没及时固定或固定液浓度不够；另固定前干枯标本，染色后易出现灰染现象，很难补救。

2.2固定

（1）固定剂对组织有一定媒染作用，它既可与蛋白结合又能与染料结合，可增强着色能力，同时能沉淀和凝固细胞内成分，使细胞内成分产生不同折光率造成光学差异。故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因

（2）在日常病理制片中淋巴结处理不当造成切片染色后组织见发灰现象，其主要原因由于细胞密集，结构复杂导致固定液难以渗透到组织深部，从而造成组织中央固定不佳，而出现彻底发灰现象。可用等量无水乙醇乙醚混合液处理切片5-10分钟，乙醇洗，水洗，3%硫酸铁铵溶液补充媒染5分钟既可。

（3）送检标本部分用乙醇固定组织，常温下乙醇的白蛋白，球蛋白不再溶于水，而核蛋白则可溶于水。故乙醇固定标本切片，切片染色不良，细胞质染色较差。切片出现模糊不清现象，其补救办法液4%中性甲醛对标本再固定。

3.其他原因

3.1温度：

包埋/切片后烤片温度过高，均会使蛋白发生质变可能发生拒染，造成切片染色模糊不清。

3.2染料：

质量差或溶液配制不当，如配制苏木精时加热使氧化过度，不能生成三氧化苏木红生成四氧化苏木红使染液没有染色能力或苏木精使用时间过久，导致切片着色能力或苏木精使用时间过久，导致切片着色不良，切片模糊不清。

3.3分化过度 细胞核着色淡

3.4脱水

透明不彻底：切片如在二甲苯中有白雾现象发生即表示乙醇脱水未尽，应立即返回重新脱水。否则，镜下组织结构模糊不清。

3.5封固

（1）注意避免封片者口鼻呼出气接触组织上封剂。

因呼出气体中会含水分；

（2）在潮湿环境中动作要快，以免空气水进入封固内响质量。