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2022-06-08 11:22:42
原位杂交检测
【实验原理】
原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。
【应用简介】
基因组原位杂交主要是利用物种之间DNA同源性的差异，用另一物种的基因组DNA以适当的浓度作封阻，在靶染色体上进行原位杂交。
荧光原位杂交利用荧光标记的核酸片段为探针，与染色体上的DNA杂交，通过荧光检测系统(荧光显微镜)检测信号DNA序列在染色体或DNA显微切片上的目的DNA序列，进而确定其杂交位点。
多彩色荧光原位杂交是用几种不同颜色的荧光素单独或混合标记的探针进行原位杂交，能同时检测多个靶位，各靶位在荧光显微镜下和照片上的颜色不同。
【实验流程】
【样本送检要求】
【案例展示】
【常见问题】
1、RNA探针长度以50-150bp为佳，探针已进入细胞，杂交率高，杂交时间短。
2、原位杂交反应中探针浓度应超过靶序列的浓度，探针浓度必须给予该实验最大信噪比，因为背景着色度高低与探针浓度有关。
3、杂交温度应低于解链或溶解温度20-30℃。杂交反应的时间可随探针浓度的增加而缩短，杂交时间过短会造成杂交不完全，杂交时间过长会增加非特异性着色。
4、组织固定或蔗糖脱水不好会使组织有较多的空泡。
【服务流程】
