【实验原理】

流式细胞术(flow cytometry, FCM)是一项新型的、发展迅速的生物医学分析技术,它是集激光技术、光电测量技术、计算机技术、流体力学以及细胞免疫荧光化学技术 、单克隆抗体技术为一体的新型高科技细胞分析技术。

流式细胞仪使细胞或微粒在液流中流动,逐个通过一入射光束,并用高灵敏度检测器记录下散射光及各种荧光信号,从而得以对粒子进行多参数分析,包括诸如粒子形状和大小、细胞周期、细胞内细胞因子、细菌表面抗原、细胞DNA内含物等。FCM检测的粒子一般为活性细胞,通过激光光源激发细胞上所标记的荧光物质的强度和颜色以及散射光的强度可以得到细胞内部各种各样的生物信息。另外FCM还可进行细胞分选,可以根据所检测细胞的某种性质进行分选,并且如果分选的过程是在无菌条件下进行的,这些细胞还可以用来培养。

【应用简介】

医学应用

1. HIV免疫分型，CD4绝对计数

2. 白血病和淋巴瘤的免疫分型

3. 肿瘤的细胞周期和倍体分析

4. 网织红细胞计数

5. 细胞移植的交叉配型和免疫状态监测

6. 干细胞计数

7. 残量白血病细胞检查

8. HLA-B27检查

9. 血小板功能及相关疾病

科研应用

1. 在免疫研究学中的应用：

结合免疫荧光方法，流式细胞术可辨认和计数带有不同表面特异性抗原的细胞，以及研究各种外源凝集素与细胞表面结合的竞争性等。

2. 在神经生物学研究中的应用：神经干细胞和神经祖细胞的特性研究；不同类型的神经细胞的鉴定和功能研究；检测细胞活性，细胞凋亡和细胞周期等。

3. 在肿瘤研究中的应用：
   流式细胞术可在实验和临床中评价肿瘤化疗和放疗的作用，现在根据流式细胞术和细胞动力学数据来监视肿瘤治疗的工作已经在实际工作中开展起来。

4. 在细胞生物学和分子生物学研究中的应用：

流式细胞术可用于测定细胞周期各时相细胞的百分比。
    用流式细胞术可进行多参数分析，即同时测定一个细胞的多种性质。

5. 在高通量监测和新药研发中的应用：细胞功能变化的研究；细胞周期和活性；新药研发；培养基研发等。

6. 海洋生物学：富集和分析细菌、藻类、浮游植物等。

7. 微生物学：细菌和酵母检测；荧光蛋白检测。

8. 生物燃料

9. 遗传学研究：

用流式细胞术测定染色体DNA含量,可得到染色体频率分布图

【实验方法】

Step1：制成单细胞悬液（组织样本）

Step2：溶血（细胞样本无需进行此步骤）

Step3：离心去上清

Step4：调整细胞密度

Step5：加入相应的标记抗体

Step6：孵育

Step7：洗涤后离心去上清

Step8：上机检测

【样本送检要求】

【案例展示】

【常见问题】

1. 待测样本量至少lml，样本应在采集后6h内处理，不可使用冷冻的标本或溶血样本。

2. 细胞活性要好，否则易发生非特异性荧光染色。

3. 确保标本上机检测前的细胞浓度为1×106／ml，细胞浓度过低则直接影响检测结果。

4. 操作方面，保证流式细胞仪在整个工作过程中处于最佳状态，能保证定量检测的准确性和检测精度。使用标准样品调整仪器的变异系数在最小范围，分辨率在最好状态，能避免在测量过程中仪器条件的变化引起的检测误差。

5. 在红色荧光对蓝色荧光散点图上，还可见到细胞凋亡区向细胞坏死区迁移的轨迹，可能是凋亡细胞的DNA进一步降解的缘故。

6. 用Heochst 33342染料与细胞孵育的时间不宜过长，一般控制在20min之内为宜。如果太长可引起Heochst 33342的发射光谱由蓝光向红光的迁移，导致红色荧光与蓝色荧光的比例改变，从而影响结果的判断。

【服务流程】