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2022-06-08 16:53:53
双荧光素酶实验
【实验原理】
利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游， 构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。
【应用简介】
双荧光素酶实验通常用于以下研究方向:验证miR同mRNA靶向互作、验证miR同lncRNA靶向互作、启动子结构分析、验证特定转录因子同其调控序列的作用等。
主要应用领域
1、潜在启动子/启动子核心区域检测；
2、潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测；
3、启动子区可能的转录因子结合位点检测；
4、启动子/增强子与转录因子的相互作用；
5、病毒/细胞相互作用；
6、药物等化学诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）；
7、射线等物理诱导因素对启动子活性的调节（抑制或增强）。
【实验方法】
【样本送检要求】
【案例展示】
【常见问题】
1、由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
2、Renilla荧光素酶检测工作液后需配制后立即使用，不可配制成工作液后长期保存。
3、Luciferase Assay Reagent II (LAR II)不能反复冻融，保证每次用同一批次的LAR II。配好的LAR II在-20度可稳定一个月，在-70度 可稳定一年。
4、试剂保存和使用时都应避光。
5、为取得最佳测定效果，测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内（1-2秒）。
6、使用过程中切勿接触操作屏（程序会被终止或取消）。
7、平时尽量不要移动仪器，防止触摸屏走位。
【服务流程】
